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関節リウマチ関節液とヒアルロン酸／材料・対象・方法

培養ヒト関節軟骨細胞に及ぼす関節リウマチ患者関節液の影響を、そのアポトーシス誘導能の点から検討し、またこの系における高分子ヒアルロン酸の影響についても検討しました。

１．材料

培養ヒト軟骨細胞は米国Ｃａｍｂｒｅｘ社より入手した正常ヒト膝関節軟骨細胞（ＮＨＡＣ－ｋｎ）を用い、指定された培養液を用いて培養、継代しました。

ヒアルロン酸は分子量８０万相当、分子量１９０万相当のヒアルロン酸１％溶液を電気化学工業より分与されました。

２．対象

関節リウマチ患者６例、変形性膝関節症患者４例で、女性８例、男性２例でした。年齢は３８～７４歳（平均５９．５歳）、関節リウマチではｓｔａｇｅⅢ～Ⅳ、ｃｌａｓｓ２～３、一例はムチランス型、一例はｓｔａｇｅ、ｃｌａｓｓ不明例でした。

関節液は、滑膜切除術や人工膝関節置換術時に採取した関節液を３０００回転で１０分間遠心して、上澄を分取し、－８０℃で保存したものを使用しました。

３．軟骨細胞のアポトーシス誘導

ＮＨＡＣ－ｋｎを指定された方法で６－ｗｅｌｌ培養プレートに継代し、ｓｕｂｃｏｎｆｌｕｅｎｔに達するまで培養した後、患者関節液を１０％の濃度で加えて一晩培養しました。

一部実験では、この培養系に高分子ヒアルロン酸を添加し、その影響を検討しました。

４．アポトーシス細胞の検出

ＴＵＮＥＬ染色のＡｐｏｐＴａｇキット（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ　ｌｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｌｎｃ）を用いて軟骨細胞のアポトーシスを検出しました。

細胞を培養プレート中で、１％ＰＦＡ／ＰＢＳにて１０分間処理して固定した後、トリプシンで剥し、スライドガラスに塗沫、風乾しました。

キット添付のマニュアルに従い、エタノール：酢酸＝２：１溶液で５分間再固定した後、２０μｇ／ｍｌ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋにて１５分間消化反応後、ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｄｅｏｘｙｎｕ－ｄｅｏｔｉｄｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＴｄＴ）による免疫組織化学で陽性細胞を検出しました。

また別途、２％　Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（Ｓｉｇｍａ）を培養系に加え、３７℃、５％ＣＯ２下で３０分反応させた後、蛍光顕微鏡にて核の形態を観察しました。

いずれの場合も各サンプルについて約１５０個の細胞をカウントし、アポトーシス陽性率を算出しました。

（続く）

参考になさってください。

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管理人からのコメント

ヒアルロン酸選びのポイントとして、

１．信用力のある会社のヒアルロン酸を選ぼう
２．コストパフォーマンスが良いものを選ぼう

とご案内しましたが、このヒアルロン酸は、日本有数の食品メーカーであるキューピー社のものですので、会社の信用力はダントツです。健康食品メーカーは中小企業が中心なだけに、不安がぬぐいきれない消費者の方々には最適な商品と言えるかもしれません。

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つまりコストパフォーマンスの面でも、これらの主要なヒアルロン酸の中では１位ということですね。

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飲んでみると、小さい粒なので飲みやすいです。味やにおいはほとんどなく、気になりません。表面がツルツルしているので、ひっかかりなどもなく、スっと飲みこめます。



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同時に基本の健康成分であるビタミンＢ・ビタミンＣが摂取できる点も魅力です。

参考にしてみてください。

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